大肠杆菌O157H7的检验

大肠杆菌O:H7的检验

1、培养基制备：

改良EC新生霉素增菌肉汤（mEC）：EC肉汤灭菌后添加20mg/mL过滤除菌的新生霉素，使终浓度为20μg/mL。改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）：山梨醇麦康凯琼脂加入过滤除菌的1%亚碲酸钾溶液，使终浓度2.5mg/L，头孢克污，使终浓度为0.05mg/L。MUG-LST肉汤：LST肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG），使终浓度为0.1g/L。2、增菌培养秤取25克样品放入mLmEC中，均质。于41±1℃培养18-24小时。3、分离将mEC肉汤培养物10倍递增稀释。从10-4，10-5，10-6稀释度，各取0.1mL涂布于TC-SMAC平板。于36±1℃培养18~24小时。可疑EHECO:H7菌落扁平，透明或半透明，边缘光滑，呈淡褐色中心，直径约2mm。4、鉴定挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接种MUG-LST，于36±1℃培养18~24小时，出现产气，且无荧光者，分离到普通营养琼脂。对纯菌落用EHECO:H7标准血清或胶乳凝集试剂作凝集试验，必要时进行生化试验。在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经℃水浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步结果，阳性反应者需作进一步证实。EHECO:H7检验程序图解

用上述方法在样品中分离获得的纯菌落，经抗E.coliO:H7标准血清或EHECO:H7胶乳凝集测试为阳性者，报告检出肠出血性大肠杆菌O:H7。

如需要进一步检测Vero毒素基因的存在，可通过接种Vero细胞或Hela细胞，观察细胞病变进行判定，或可使用基因探针检测和聚合酶链反应（PCR）检测法。（参见FDA细菌分析手册第8版）

传统的使用改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）检测大肠杆菌的方法，不仅需要经验丰富的专业人员进行检测，而且要从大量的菌群中挑选并区分出山梨醇阴性菌落，流程复杂繁琐，环境要求苛刻。O显色培养基能为您解决这一烦恼，利用先进的菌落显色技术（O生长紫红色菌落，其他大肠杆菌生长蓝色菌落），大大简化您的工作量。

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