微生物专题动物样品粪便肠道内容物肠

在微生物测序中，样本的准备是获得高质量DNA的前提，而样本准备也正是让众多微生物科研工作者感到困扰的重要一步。

今天就让小编向您介绍介绍粪便、肠道内容物、肠道黏膜的取样与保存方式。

1、人粪便样本采集

1）准备好无菌的便盆和粪便容器，洗手，带上手套收集新鲜的粪便样本；

2）在实验室将装好受试者粪便样本，立即放在冰上进行分装并标记；

3）用无菌牙签或粪便取样器截取样品中段里部（粪便表层含有肠粘膜脱落细胞），外部容易污染，且接触空气后，部分细菌DNA开始降解；

4）用灭菌离心管每管称取0.5g左右粪便样本，每个样本取多管备份，推荐10管；

5）分装好后，若当天提取DNA，可以先放4℃，长期存放需先迅速放入液氮中，之后立即放入-80℃保存。

6）每次实验使用一管，未用完丢弃。

注：如粪便样品量较多或不能马上收集，最迟要在2小时之内全部收集完。

另附：人类微生物组计划（HMP）和国际人类微生物组标准（IHMS）的取样方法

1、准备所需器材

2、贴标签，标注信息

将标签纸③贴在带勺粪便采集管②（若粪便采集管自带标签可不用再贴）及自封袋④上。在所有标签上注明取样对象信息（姓名、样本编号、样本类型、取样时间等）。

温馨tips：用透明胶带在粪便采集管标签上至少缠绕一圈，并在管盖上标识名称，更加保险。

3、收集粪便样品

将粪便样本收集系统①置于马桶上，放下马桶座圈，排便，再将手洗干净。

温馨tips：尽量在收集粪便样本前将尿液排尽，再将手洗干净。

4、取样

将粪便样本收集系统①的盒子拿出，用勺子②截取粪便中段内部一勺（约1g，勺子不要装得过分满）

5、装样

将勺子垂直放入粪便采集管②，拧紧盖子。

6、重复取样

一式三份，重复步骤4~5；

7、寄送样品

将粪便采集管②放入自封袋④中，液氮速冻后-80℃保藏或直接置于干冰上运输。

2、小鼠粪便样本采集

1）将待取样的小鼠放进干净的铺有消毒滤纸的笼子里，小鼠排便后立即收集粪便样本。不同的小鼠取样要更换新的滤纸；

2）单个小鼠用灭菌离心管称取0.2g样本，分装好后立即放入-80℃保存；

3）单个小鼠粪便样本不满足0.2g，根据课题需求，可以将多个小鼠粪便样本混合为一个样品；

4）样本珍贵，需进行备份。

1）在实验对象死亡后，用无菌解剖刀，在无菌状态下取出整个肠道，切取所需肠段的内容物（条件允许的话，可在无菌操作台进行）；

2）用无菌手术刀挖取内容物，立即放在冰上进行分装并标记（建议使用干冰运回实验室）；

3）立即进行DNA抽提。如果不能立即抽提，建议将样本先置于液氮中冷冻4小时以上，再转移到-80℃保存；

4）单个样本取样量：大型动物，如牛、羊mg-mg/管；中型动物，如大鼠、家兔-mg/管；小型动物，如小鼠-mg/管；对于肠道内容物较少动物，如鱼、虾≥mg/管。为保证实验顺利进行，在采样允许的情况下，尽量多采集样品。

推荐试剂盒：QIAampFastDNAStoolMiniKit或OMEGAE.Z.N.A.?StoolDNAKi

1）在无菌环境中将整个肠道移出体外；

2）取不同部位肠段，然后在肠系膜的对面纵向切开，使肠腔外露；

3）用无菌取样器对内容物进行取样、保存；

4）将肠道内容物清理干净后，用无菌生理盐水轻轻清洗肠腔，清除看得见的肠容物（避免扰乱肠粘膜）；

5）用无菌载玻片轻刮肠道粘膜（避免穿透基底膜）。所有样品取完后立即放入液氮冷冻，并放在-80℃保存。

推荐试剂盒：MPBIOFASTDNA?SPINKitforSoil(MPBio,SantaAna,CA)

实验部林爱强文案

市场部潘旭兰编辑

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