体外肠囊评估肠粘膜通透性

为了对肠吸收或通透性的活体评估，检测整个胃肠道吸收情况，比较肠内运输分子的特异性。利用“肠囊”的体外渗透性分析是一种快速而灵敏的测量方法。该技术可作为一种评估药物吸收的方法，或用于检查胃肠道疾病动物模型肠上皮细胞屏障功能障碍。

1.肠囊实验技术要点

1.在安乐死前，空腹12小时。

2.使用剪刀，在腹部中间做一个水平切口，并暴露腹膜。

3.从胃幽门括约肌切下小肠，至肛门边缘切除大肠。用镊子轻轻地取出肠系膜。把肠道放在PBS中。

4.为了保持动物之间的一致性，测量相对于胃的位置十二指肠和空肠，相对盲肠位置的结肠和回肠。

5.使用1毫升注射器，轻轻地用PBS(37°C)冲洗肠段内容物与预培养皿。这些粪便内容可能被丢弃或储存在-80°C做其他的分析。

6开始制备肠囊，从肠段的开口处测量5厘米，并在一端用一个缝合环固定。另一端肠道的开口插入导管，注入标记FITC需要测试的分子溶液。

7.轻轻取下导管，确保肠管闭合。将肠囊放入装有20毫升预热培养基的50毫升离心管中，

8.分别在0、30、60、90和分钟的时间点，取μl样本移液到96板，再加μl培养基到含肠囊的离心管中。

9.取完最后的样本后，切开肠囊，露出粘膜表面。测量每个肠段的长度和宽度。如果需要,快速OCT包埋或冰冻组织储存到-80°C。

10.检测标记FITC的样品，根据公式计算肠囊的表观渗透率。

C57Bl/6小鼠胃肠道的示意图

肠囊制备

2.肠囊外翻实验与肠囊实验类似，需要将肠道翻转，使肠粘膜向外侧。

肠囊外翻实验流程（Evertedgutsacprocedure）

（做药物吸收分析）

参考文献

1.Mateer,S.W.,Cardona,J.,Marks,E.,Goggin,B.J.,Hua,S.,Keely,S.ExVivoIntestinalSacstoAssessMucosalPermeabilityinModelsofGastrointestinalDisease.J.Vis.Exp.(),e,doi:10./().

2.RahamatullahShaikh,ThakurRaghuRajSingh,MartinJamesGarland,ADavidWoolfson,andRyanF.Donnelly.Mucoadhesivedrugdeliverysystems.JPharmBioalliedSci.Jan-Mar;3(1):89–.

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